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　　2.實(shí)驗室檢測方法

　　(1)Real-time RT-PCR方法

　　各網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室應用Real-time RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感病毒。建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節性流感H1、H3亞型病毒和禽流感 H5N1病毒，并同時(shí)檢測swInfA和swH1特異性基因片段。

　　(2)RT-PCR方法

　　中國疾病預防中心國家流感中心同時(shí)設計了RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感病毒。建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節性流感H1、H3亞型病毒和禽流感 H5N1病毒，并同時(shí)檢測H1HA和SWH1HA-1特異性基因片段。

　　(3)病毒分離

　　按照相關(guān)生物安全規定，有條件的實(shí)驗室可同時(shí)接種MDCK細胞和SPF雞胚，進(jìn)行甲型H1N1流感病毒分離和基因序列測定。

　　3.標本上送

　　(1)各網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室檢測甲型H1N1流感病毒陽(yáng)性的，應盡快將原始標本和病毒分離物送中國疾病預防控制中心病毒病所進(jìn)行檢測、復核、確認。

　　(2)全國所有實(shí)驗室在季節性流感哨點(diǎn)監測和流感樣病例暴發(fā)疫情監測中，檢測甲型流感病毒陽(yáng)性，季節性流感病毒H1、H3亞型和禽流感病毒H5N1亞型陰性，但無(wú)法鑒定亞型的標本，應盡快送中國疾病預防控制中心病毒病所進(jìn)行檢測、鑒定。

　　4.生物安全

　　甲型H1N1流感病毒及其樣本的采集和儲存應遵照世界衛生組織發(fā)布的《實(shí)驗室檢測指南》進(jìn)行。甲型H1N1流感病毒及其樣本運輸、實(shí)驗活動(dòng)及風(fēng)險評估應按照世界衛生組織手冊(第三版)及《引起當前全球疫情的甲型H1N1流感疑似或確診樣本操作實(shí)驗室生物風(fēng)險管理》推薦技術(shù)指南(5月6日發(fā)布)進(jìn)行，其中樣本檢測活動(dòng)在生物安全二級實(shí)驗室進(jìn)行，病毒分離和培養活動(dòng)須在生物安全三級實(shí)驗室進(jìn)行。實(shí)驗室工作人員須采取與實(shí)驗活動(dòng)相適應的個(gè)人防護措施，并對人員進(jìn)行必要的健康監測。相關(guān)實(shí)驗室須儲備充足的個(gè)人防護用品、實(shí)驗室消毒用品和適量的預防和治療藥物(如扎那米韋或奧塞他韋)。實(shí)驗活動(dòng)相關(guān)廢物處理須嚴格按照我國生物安全管理法律法規進(jìn)行。

　　5.檢測結果報告和反饋

　　各網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室在獲得確切實(shí)驗室檢測結果后，應立即向各省級衛生行政部門(mén)、中國疾病預防控制中心和衛生部報告。中國疾病預防控制中心在獲得實(shí)驗室檢測結果后，應立即向衛生部報告，同時(shí)反饋給送檢標本的實(shí)驗室。

　　(五)病例排查和訂正

　　實(shí)驗室檢測結果應及時(shí)反饋給病例報告單位。對于明確診斷為其他疾病或明確排除甲型H1N1流感的病例，報告單位應在接到實(shí)驗室檢測結果2小時(shí)內將病例訂正為已明確診斷的疾病或“其他不明原因疾病”。對于診斷分類(lèi)變化的病例，如疑似轉為確診病例等，報告單位應在接到實(shí)驗室檢測結果后2小時(shí)內訂正。

　　(六)病例診斷與疫情公布

　　各省首例甲型H1N1流感確診病例的標本應送中國疾病預防控制中心進(jìn)行檢測、復核，由衛生部組織專(zhuān)家組，結合病例的臨床、流行病學(xué)和實(shí)驗室等證據進(jìn)行診斷結果的確認，并統一發(fā)布疫情。

　　首例病例確認并公布后，各省甲型H1N1流感病例由各省級衛生行政部門(mén)組織本省專(zhuān)家組進(jìn)行診斷，省級衛生行政部門(mén)經(jīng)衛生部授權后，負責向社會(huì )發(fā)布本行政區域內甲型H1N1流感疫情信息。

　　四、加強季節性流感監測

　　(一)加強哨點(diǎn)監測

　　1.開(kāi)展半年監測的省份自本方案下發(fā)之日起，開(kāi)展全年監測，包括北京、天津、河北、山西、內蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、山東、河南、西藏、陜西、甘肅、青海、寧夏、新疆。其余南方片省份繼續開(kāi)展全年監測。

　　2.在原有全國84家網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室和197家哨點(diǎn)醫院的基礎上，中國疾病預防控制中心應及時(shí)對各省份其他地市級實(shí)驗室的評估，逐步將具備檢測能力的實(shí)驗室納入流感監測網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室。

　　3.各哨點(diǎn)醫院要加強門(mén)急診ILI和門(mén)急診就診總數的及時(shí)按周報告。各省級疾控中心要每周分析監測數據，重點(diǎn)分析流感樣病例的比例、病毒分離陽(yáng)性率、監測工作完成及時(shí)性等指標，通過(guò)分析，及時(shí)觀(guān)察、評估流感活動(dòng)的異常變化情況，并及時(shí)向各級衛生行政部門(mén)和中國疾病預防控制中心報告。

　　4.各監測哨點(diǎn)醫院，在原方案要求每周采集門(mén)急診ILI病例的呼吸道標本5-15份基礎上，增加到20-30份。

　　(二)流感樣病例暴發(fā)疫情監測

　　各級各類(lèi)醫療機構和疾病預防控制機構根據衛生部下發(fā)的《流感樣病例暴發(fā)疫情報告及調查處理指南(試行)》(衛辦疾控發(fā)[2006]108號)文件要求，要加強流感樣病例暴發(fā)疫情的監測、報告，以及標本采集和實(shí)驗室診斷。

　　(三)實(shí)驗室檢測程序

　　各網(wǎng)絡(luò )實(shí)驗室首先應用Real time RT-PCR和/或RT-PCR檢測乙型流感病毒、甲型流感病毒、季節性流感H1、H3亞型、禽流感H5N1亞型和甲型H1N1流感的特異基因片段。然后根據核酸檢測的結果，分別在生物安全2級和3級實(shí)驗室，進(jìn)行季節性流感病毒、禽流感H5N1病毒和甲型H1N1流感病毒的分離培養。

　　如甲型流感病毒陽(yáng)性,排除上述亞型流感病毒，仍無(wú)法鑒定亞型的臨床標本、以及禽流感H5N1病毒或甲型H1N1流感病毒分離物等送中國疾病預防控制中心病毒病所檢測、鑒定。

　　五、中國疾病預防控制中心技術(shù)支持部門(mén)和聯(lián)系方式

　　(一)疾病控制與應急處理辦公室：負責疫情的追蹤、協(xié)調和接收疫情相關(guān)資料。

　　電話(huà)：010-63132071，傳真：010-63131229，值班手機：13699123721，電子郵箱：cdchb@

　　(二)實(shí)驗室管理處：負責標本運輸相關(guān)審批。

　　電話(huà)：010-63132237，傳真：010-63132235，

　　值班手機：13811698250

　　(三)病毒病所：負責標本接收和實(shí)驗室檢測。

　　標本接收電話(huà)：010-63536459，傳真：010-63536459

　　國家流感中心實(shí)驗室技術(shù)支持電話(huà)： 010-63580764，

　　傳真：010-63580764